伯森電子報 2017年6月號第3期 無法看到畫面顯示?請點選這裡開啟網頁
膜蛋白研究最佳助力 — ■ Nanodisc ■ Rho1D4 ■ Ultrapure Detergents
Nanodiscs — 穩定膜蛋白,維持其構型與活性,使下游膜蛋白分析實驗更加精準順暢! Nanodiscs 是由磷脂分子與膜支架蛋白 (membrane scaffold protein, MSP) 所組成,能提供膜蛋白一個近似原生磷脂雙層膜的環境,從而維持膜蛋白的穩定性與生理功能。經由 Nanodisc 包覆所組成的膜蛋白複合體,可以直接被親和性層析等常用蛋白質純化方式分離出來,並應用於多種下游實驗,諸如結構分析、活性研究、藥物開發等。
Nanodiscs 相關文獻: ● Membrane protein production § in E. coli lysates in presence of preassembled nanodiscs. Methods Mol. Biol. (2017) 1586:291-312. ● Analyzing native membrane protein assembly in nanodiscs by combined non-covalent mass spectrometry and synthetic biology. eLife (2017) 6:e20954. ● Integral membrane proteins can be crystallized directly from nanodiscs. Cryst. Growth Des. (2017) 17(3), 945–948.
【膜蛋白-Nanodisc 複合體之製作方式圖解】(A). Cell-free Expression & Integration — 利用 Cell-free expression system 生產的膜蛋白,直接加入組裝好的 Nanodisc,並不需要添加多餘的 Detergent,減少了人為因素的干擾。 (B). 2-step Solubilization & Reconstitution — 如果膜蛋白已被分離出來並保存於 Detergent 中,僅需加入適量 MSPs 與磷脂分子, Nanodisc 膜蛋白複合體便會自行組裝完成,接著可利用親和性層析將複合體分離出來。
【膜蛋白-Nanodisc 複合體之製作方式圖解】
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Rho1D4 —  膜蛋白純化的絕佳選擇! 伯森特別推薦的「Rho1D4 純化系統」是由 Rhodopsin C 端的特定多肽序列、與其高專一性單株抗體所研發而成。 帶有 Rho1D4 tag 的膜蛋白通過具 Rho1D4 抗體的膠體,利用親和性層析純化原理,純化膜蛋白產量可達 4 mg/ml! Elution 步驟改採加入 Rho1D4 多肽,與結合在膠體上的膜蛋白進行競爭,相較於其它 Elution 方式 (例如改變 pH),本系統採用的 Elution 方式對膜蛋白更加溫和,有助於維持其構形與生理活性。
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Ultrapure Detergents — 高純度 >99.5% Detergents, 適合膜蛋白純化及結晶使用!
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