伯森生技電子報 2018年2月號第1期 無法看到畫面顯示?請點選這裡開啟網頁
[科技焦點] 從 Nature Method 期刊論文看見「抗體驗證」的重要性
國際抗體驗證工作小組 (IWGAV) 提出五大抗體驗證策略 —— 抗體的專一性不佳常導致實驗結果無法再現,而各家廠商常見提供的 WB/IHC 實驗數據,事實上僅為「應用有效性」的驗證,並不能排除抗體的非專一性結合問題。有鑒於此,跨國組織【國際抗體驗證工作小組】 (IWGAV) 透過 Nature Method 期刊提出了五大抗體驗證策略 (見右方圖表),建議抗體至少需通過其中一種驗證,才能證明抗體的專一性。這五種驗證策略中,Knockout 驗證是最有力且廣為接受的抗體專一性驗證方法。此方法是以 CRISPR-Cas9 或 RNAi 剔除目標基因後,再進行 WB/IHC/ICC 等偵測實驗,以確認抗體不會誤認到任何非專一性目標。如下方範例實驗所示。 [圖表] 五大抗體驗證策略:(1) 基因驗證法 Genetic : 目標蛋白因為基因剔除 (Knockout) 而不表現,抗體不應該辨認到目標蛋白 ; (2) 複方驗證法 Orthogonal : 以抗體無關的方法學 (例如 MS) 分析比較此方法學與抗體測得目標蛋白表現量的相關性; (3) 獨立抗體驗證法 Independent Antibody 以多種針對同一目標蛋白但不同抗原辨識位的抗體,互相比較實驗結果; (4) 標記蛋白表現驗證法 Tagged Protein Expression : 驗證目標蛋白的表現量與其標記物的表現量是否正相關; (5) 免疫沉殿質譜法 IMS : 以免疫沉澱 (IP) 捕捉目標蛋白後,進行質譜分析。 (資料來源:Nat Methods. 2016 Oct;13(10):823-7. doi: 10.1038/nmeth.3995.)
KO Validation by ICC - HAP1 WT (wild-type) and HAP1 Ki67 KO (knockout) cells were used to confirm specificity of anti-Ki67 antibody in ICC.
選擇通過專一性驗證的抗體,讓您的投稿論文更有說服力 —— 隨著 Cell、Nature、Science 等頂尖科學期刊對於刊登內容的「實驗可重現性」的重視,已有越來越多科學期刊要求研究人員在投稿論文時,必須同時提供所使用抗體的相關驗證資訊。因此建議所有研究人員,在購買抗體時注意下列兩點:(1) 抗體供應商是否提供 Knockout 驗證 (KO Validated); (2) 如果沒有提供,可以查閱相關文獻找出專一性相關的實驗結果,儘可能挑選有實驗數據支持的抗體。
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