伯森生技電子報 20197月號第3 無法看到畫面顯示?請點選這裡開啟網頁
免疫檢測實驗技術 — 從 RIA 到 DELFIA

比傳統 ELISA 更靈敏的
免疫檢測實驗技術 — DELFIA

免疫檢測技術發展回顧

在談論 DELFIA 之前,讓我們先來簡短地回顧一下免疫檢測技術的發展進程。時間倒回到 60 年代,美國科學家 Yalow 和 Berson 創立了放射性免疫分析方法 (Radioimmunoassay, RIA),從此打開了免疫檢測技術的潘朵拉盒。

Yalow 和 Berson 創立了 RIA 檢測法,並獲得 1977 年諾貝爾獎。IMAGE © The Nobel Prize.

在隨後的幾十年中,平均每十年出現一種全新的免疫檢測技術,而在 DELFIA 出現之前,科學家們使用最多的就是 ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)。ELISA 技術原理是通過連接有酵素的抗體或抗原、以及酵素受質,經由呈色受質對特定波長可見光的吸收強弱,來檢測樣品中待測物的含量。這個方法最大的優點就是避免了放射性同位素的使用,打響了非放射性免疫檢測的第一槍。

ELISA 方法克服了傳統 RIA 安全性的隱患,但其檢測靈敏度和偵測範圍卻受限於光吸收技術的固有缺陷,即溶液顏色變化易受外在環境影響,並且 OD 值有效線性範圍過低。

經典 ELISA 檢測原理

DELFIA — 比傳統 ELISA 更靈敏

1982 年 Halonen 等人在《Journal of Clinical Microbiology》雜誌上發表論文〈Time-resolved fluoroimmunoassay: a new test for rubella antibodies〉,昭示著免疫檢測正式跨入螢光時代,這也是 DELFIA 技術的原型。DELFIA,即 Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay,為使用鑭系元素 (lanthanide) 作為信號源的免疫分析技術。

DELFIA 檢測原理

鑭系元素是一類具有螢光性質的特殊元素,與一般螢光分子不同,當其形成特定螯合物 (Chelate) 以後,其螢光訊號衰減週期非常長(可達微秒等級);並且其激發光 (Excitation) 與發射光 (Emission) 波長差距極大,代表訊號不易互相干擾;其他鑭系元素特點尚包含有:

穩定性高:增加了實驗操作的靈活性與便利性。
多目標偵測:鑭系元素中的銪 (Eu)、釤 (Sm)、鋱 (Tb) 和鏑 (Dy) 發射光波長差異明顯,至多可同時進行 4-plex 分析。

鑭系元素螢光螯合物具有超長的訊號衰減時間,以及寬達 200-300 nm 的斯托克斯位移 (Stokes shift)。

與傳統 ELISA 技術相比,DELFIA 最大的不同處就是改採用鑭系元素螢光螯合物作為信號源,其他實驗流程步驟皆與 ELISA 極其相似,但靈敏度和檢測範圍則遠高於 ELISA,最大可達 10-18 M,並且不需額外添加終止液 (Stop solution)、訊號更加穩定不易受環境或時間因素影響,是一種理想的 ELISA 替代技術。值得一提的是,在 DELFIA 分析反應中,標記的生物分子實際上是無螢光的,然而當結合反應完成後,加入增強液或 DELFIA 誘導劑,就可以產生螢光,而且信號得到極大地增強,可提高 100 萬倍。

DELFIA 和傳統 ELISA 檢測效果比對

PerkinElmer 提供傳統 ELISA 轉換為 DELFIA 檢測平台的全套解決方案,更多技術原理與相關產品資訊請參閱《Unmatched Sensitivity Time After Time - DELFIA® TRF Technology》,或洽詢 PerkinElmer 台灣代理 — 伯森生技。

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