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友善列印AlphaLISA Epigenetics Reagents

AlphaLISA Epigenetics Reagents 是由 Alpha 技術所延伸出來的便利產品,可適用於偵測 Peptide 或 Full-length 型式的 Histone 蛋白。具有高度專一性,可藉由偵測各種後轉譯修飾類型的 Histone 蛋白,精確定量組蛋白密碼 (histone code) 調控者 (例如 Acetyltransferase, Methyltransferase, Deacetylase, Demethylase) 的酵素活性。與 ELISA 產品相比,AlphaLISA 偵測試劑具有更加寬廣的偵測區間,可減少樣品稀釋比例的測試步驟;並且具有更精簡快速的實驗流程,讓研究者能夠更快取得定量結果。

 

作用原理:

AlphaLISA 偵測技術是由兩種核心物質所組成,一為 Donor bead,另一為 Acceptor bead。Donor bead 本身身帶有光敏感物質 "Phthalocyanine",因此當以 680 nm 雷射光激發 Donor bead 時,此光敏感物質可催化周遭的氧分子形成活化態,並於作用範圍內激發鄰近的 Acceptor bead 產生化學冷光反應,此冷光能量會進一步轉移至 Acceptor bead 本身所帶有的螢光物質,使其最終產生 615 nm 螢光訊號。與其他偵測平台相比 (例如 FRET、TR-FRET),AlphaLISA 技術的能量轉移有效距離長達 200 nm,因此不論是胜肽、重組蛋白、或是細胞內原始含有的蛋白質,皆可作為實驗偵測對象。具有專一性佳、靈敏度高、偵測區間廣泛以及流程簡單等多項優質特點。

在進行實驗時,研究者僅需自行準備 (1). 待測酵素與輔因子 (cofactor)、(2). 鍵結有 Biotin 的 Histone peptide substrate (或 Histone 全長蛋白),即可開始進行實驗。此兩項所需試劑在產品應用文件中皆有詳盡的建議資訊,因此研究者可安心參照選購。

 

 

Excellent Specificity!左圖為 AlphaLISA anti-histone H3 K9me2 antibody Acceptor beads 的專一性測試結果。實驗證實此試劑的確能夠專一性地辨識偵測 H3K9me2 biotinylated peptide,並且無論是 H3K9me1 peptides、H3K9me3 peptides、methylated H3K4 peptides、unmodified H3 peptides,皆無法干擾反應產生偽陽性結果。

 

Well Validated!所有 Alpha 系列的 Histone modification 偵測試劑,皆實際使用特定酵素進行完整測試,具有詳盡的測試條件與實驗流程可供參照。例如左圖即是使用 G9a Histone H3-Lysine N-methyltransferase 所進行的酵素用量和時間反應測試結果,受測產品為 Anti-methyl-Histone H3 Lysine 9 (H3K9me2) AlphaLISA® Acceptor Beads (需同時搭配 Alpha Streptavidin Donor beads 等產品使用)。其他測試項目包含:Cofactor titration (ex, SAM)、Enzyme inhibition、Z'-factor determination.

 

訂購資訊
目前 PerkinElmer 公司已針對 Histone H3 以及 p53 蛋白質的 Methyl 與 Acetyl 後轉譯修飾,推出多款 AlphaLISA 專一性偵測產品。由於產品品項新增快速,詳細產品應用與訂購資訊,歡迎洽詢伯森各區域業務專員。

Methyl Modifications
Mark Detected AlphaLISA anti-mark Acceptor Beads
Assay Points Cat. No.
H3K4 Unmodified 500 PK-AL119C
10,000 PK-AL119M
50,000 PK-AL119R
H3K4me1-2 500 PK-AL116C
10,000 PK-AL116M
50,000 PK-AL116R
H3K9me2 500 PK-AL117C
10,000 PK-AL117M
50,000 PK-AL117R
H3K27me2-1 500 PK-AL121C
10,000 PK-AL121M
50,000 PK-AL121R
H3K27me3 500 PK-AL122C
10,000 PK-AL122M
50,000 PK-AL122R
H3K36me2 500 PK-AL123C
10,000 PK-AL123M
50,000 PK-AL123R
Acetyl Modifications
Mark Detected AlphaLISA anti-mark Acceptor Beads
Assay Points Cat. No.
H3K4 Unmodified 500 PK-AL119C
10,000 PK-AL119M
50,000 PK-AL119R
H3K9ac 500 PK-AL114C
10,000 PK-AL114M
50,000 PK-AL114R
H3K27ac 500 PK-AL120C
10,000 PK-AL120M
50,000 PK-AL120R
p53 K382ac 500 PK-AL124C
10,000 PK-AL124M
50,000 PK-AL124R
備註:(1). 每個 Assay Point 是指使用 384-well 多孔盤,每個 well 內含有 25 µl 反應體積為計算。 (2). AlphaLISA 系列產品皆屬於偵測試劑,並無提供 enzyme 與 substrate,若為原廠測試過品項,可提供您相關材料來源作為參考。
Additional Items Required for AlphaLISA histone modification assays
Product Assay Points Cat. No.
AlphaScreen Streptavidin Donor beads 2,000
PK-6760002S
10,000 PK-6760002
100,000 PK-6760002B
AlphaLISA biotin-anti-histone H3 (C-ter) antibody
(required for full-length Histone substrates)
500 PK-AL118C
10,000 PK-AL118M
50,000 PK-AL118R
AlphaLISA 5X Epigenetics Buffer 1 kit
(required for Histone H3-derived peptidic substrates)
10 ml PK-AL008C
100 ml PK-AL008F
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