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友善列印LANCE Ultra Kinase Assay Reagents

LANCE Ultra 是由美商 Revvity 公司所研發出的新型態試管內激酶活性分析 (In Vitro Kinase Assay) 技術。此技術幾乎不具有任何技術門檻,只要會使用 Pipetman 就可以進行實驗!流程簡單,從拿到待測檢體開始到取得偵測結果,只要三個步驟就能完成。LANCE Ultra 除了具有無技術門檻以及操作流程簡單的特性之外,還擁有優異的偵測靈敏度與偵測區間,不但可減少樣本用量、提高解析度、並且具有量化的數據顯示方式,非常適合應用於激酶活性分析或篩選激酶活性調控藥物。

*由於 LANCE Ultra 偵測平台的能量轉移作用距離約僅有 10 nm,因此不適合大分子偵測。例如在 Kinase assay 中通常是使用 peptide substrate 作為待測物,而不會直接使用整個蛋白質。若欲直接偵測細胞內磷酸化蛋白質的含量,另有 AlphaScreen SureFire Cellular Kinase Assay Kits 可供使用。

 

產品特點:

  • 實際經過 >310 種不同廠商來源市售 Kinases 產品實驗測試 (225 種 Ser/Thr Kinases、85 種 Tyrsoine Kinases),可提供詳盡的測試條件與 S/B 比值資訊供研究者參考 (請按此瀏覽測試實驗之技術文件範例)。
  • 全均質化 (homogeneous) 實驗流程,流程簡單且不需分離或洗滌步驟,可快速完成偵測實驗。
  • 偵測效能穩定,平均 Z' 標準值大於 0.8,確保實驗數據可信度。
實驗步驟 Western Blot ELISA LANCE Ultra
0 取得待測檢體
取得待測檢體 取得待測檢體
1 電泳 加入反應試劑
加入反應試劑
2 轉漬 清洗 x 3次 加入偵測試劑
3 Blocking 加入偵測抗體 偵測
4 1st 抗體結合 清洗 x 3次  
5 清洗 x 3次 加入 2nd 抗體  
6 2nd 抗體結合 清洗 x 3次  
7 清洗 x 3次 加入呈色劑  
8 呈色反應 加入終止反應劑  
9 偵測 偵測  

 

作用原理:

LANCE Ultra 是一種時差性螢光共振能量轉移偵測平台 (Time-Resolved Fluoresence Resonance EnergyTransfer assay, TR-FRET assay),其作用原理是藉由時差性螢光分子 "Eu Chelate" 作為能量捐贈者 (energy donor),在一定的作用距離下 (約 10 nm) 可將能量轉移至鄰近的 "ULight" 螢光分子激發其產生特定波長的螢光訊號供實驗者偵測。

以 Kinase assay 為例,當 Kinase 將標定有 ULight 螢光分子的 peptide substrate 磷酸化後,帶有 Eu 螢光分子的專一性磷酸化抗體即可結合於 peptide substrate 上,使得 Eu Chelate (能量捐贈者) 與 ULight (能量接受者) 兩者相近。此時以 320 nm 或 340 nm 雷射光激發,即可藉由能量轉移使 ULight 螢光分子發射出 665 nm 的螢光訊號。研究者可藉由偵測此螢光訊號的強弱,應用於 Kinase Inhibitor 藥物開發等…相關研究。

 

 

 

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Eu-labeled Antibody
ULight-labeled Peptide Substrate
LANCE Buffers
LANCE Ultra KinaSelect Kits - 可供測試找尋待測激酶的最佳 ULight-labeled Peptide Substrate
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