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友善列印線上下單LNA 鎖核酸引子或探針合成服務

LNA 合成服務

Locked Nucleic Acid (LNA™) 中文翻譯為"鎖核酸",是由丹麥 Exiqon 公司所專利研發製造的一種核酸類似物。本公司所提供的 LNA Oligo 合成服務項目包含:各種核酸 base 合成 (LNA™, DNA, RNA, 2'-O-methyl RNA bases)、螢光/分子標定、Phosphorothioate 修飾等…。歡迎多加利用便利的伯森客戶服務資源 02-2788-2121 / 0800-059-668 / 線上留言,讓我們知道您的合成服務需求,我們將儘速提供給您詳盡的售價資訊與技術支援。


LNA 的應用與特點

LNA™ 在結構上具有以五碳糖上的二號氧原子與四號碳原子所形成的亞甲基橋 (O2', C4'-methy-lene bridge) 特徵,此構形特徵使得 LNA™ 不但可與 DNA 或 RNA 互補序列形成正常的 Watson-Crick 鍵結,且所形成的雙股結構比起一般的 DNA:DNA、DNA:RNA、RNA:RNA 結構更加穩定。透過 NMR 與 X-ray 結晶技術可發現 LNA:RNA 與 LNA:DNA 雙股結構近似於細胞內原本的雙股核酸狀態,因此其物理性質 (如水溶性) 皆與一般核酸非常相似而容易操作。已有許多發表文獻指出在一般探針、引子、或 siRNA 的部分序列中以 LNA™ 取代,可提升探針/引子/siRNA 的親合性、專一性與穩定性,使實驗分析效能獲得明顯改善。特別是在 miroRNA (miRNA) 的研究領域上,由於 LNA™ 所獨有的高親合性與專一性使其特別適合用來偵測、區別相似的短核酸序列,在 2007 年 Nature Protocols 期刊中即有專文報導 LNA™ 在 miRNA 的原位雜交偵測實驗中 (in situ hybridization) 具有前所未有的專一性與偵測效能 (Nat Protoc. 2007;2(6):1508-14.)。其他 LNA™ 相關文獻應用領域包含:Small RNA research、mRNA antisense oligo、RNAi、SNP genotyping、Allele-specific PCR、Fluorescence Polarization probes、Molecular Beacons、Microarray gene expression profiling、Splice variant detection、Gene repair/exon skipping、Comparative genome hybridization (CGH) 等…。


LNA - miRNA 的最佳研究工具

"microRNA (miRNA) " 是近十年來學術界最熱門的研究主題之一,至目前為止已有超過 1000 種人類 miRNA 被發現 (miRBase),其功能涵蓋細胞發育、生長、恆定與凋亡等…多方面,並且已證實調節異常的 miRNA 與多種人類疾病相關 (miR2Disease)。在實驗技術上,由於 miRNA 長度短且同一家族 miRNA 成員之間往往具有高度序列相似性,因此在研究過程中具有很大的技術挑戰性。

一般來說當 DNA 探針與 miRNA 結合時,其雙股構形會於 A-type 與 B-type 之間交替轉換,產生不穩定;然而 LNA™ 卻能以其特殊結構,將與 miRNA 配對結合後的雙股結構 "鎖定" 在近似生物體內雙股 RNA 構形的 B type,使其能夠以更高的親和力形成穩定雙股,並提高雙股序列的 Tm 值,因此能夠有效且專一地偵測 miRNA。從右表中亦可明顯看出 LNA™ 探針具有比 DNA 探針更佳的序列專一性,其完全配對與單一位置不完全配對的雙股序列之間的 Tm 值差異 (△Tm) 高達 26°C,因此比起一般 DNA 探針更能避免非專一性結合的情形產生。

LNA™ 至目前為止已擁有近百篇的發表文獻,證實其為有效且專一性的 miRNA 研究工具,其中更有多篇被刊載於 Nature, Nature Protocols, Science, BioTechniques, Nucleic Acids Research, Neural Development, RNA 等…國際知名科學期刊中,應用範圍涵蓋 miRNA 功能研究 (microRNA Knockdown - in vitro & in vivo) 與多種偵測實驗 (如:Northern Blot, In Situ Hybridization (ISH), Microarray, Real-Time PCR (QPCR))。

LNA™ 特點
  • 增加引子或探針之 Tm 值,提高作用親合性與專一性
  • 可活化 RNase H 作用反應,適用於基因抑制實驗
  • 可增加一般基因抑制探針或 siRNA 於細胞或動物體內的穩定度,延長作用時間
  • 可被一般生物性酵素所辨識,如:T4 ligase、DNA polymerase
  • 可標定各種常用螢光或半抗原分子如:DIG、Fluorescein、Biotin
  • 可抵抗外切脢或內切脢的分解作用
  • 低細胞毒性且親水性佳

LNA - 用途廣泛的基因抑制工具

Antisense LNA™ GapmeRs 結構與功能
(A)
Antisense LNA™ GapmeR 為一段長度約 14-16 nucleotid-es 的 antisense oligo,兩端由 LNA™ base 組成,中間序列則是由 8-10 mer 的 DNA base 所組成,全股序列皆含有 phosphorothioate 骨架。(B) Antisense LNA™ GapmeR 序列兩端的 LNA™ base 可提高 antisense 的專一性與親和性,並具有抵抗 nuclease 的功能;序列中間的 DNA gap 則會在與目標 RNA 互補結合後,活化 RNase H 作用。(C) RNase H 被活化啟動,進而將目標 RNA 分解掉。

在基因抑制實驗方面,LNA™ antisense oligo 與 mRNA 所形成的雙股結構並不會活化 RNase H 作用,但藉由 LNA/DNA/LNA gapmer 結構 (將 LNA™ antisense oligo 序列中間的 7~10 mer 以正常 DNA base 取代) 即可活化 RNase H,因此研究者在使用 LNA™ antisense oligo 時可藉由調整設計方式彈性選用轉譯抑制或 RNase H 機制來達成基因抑制效果。在細胞與動物實驗中 antisense oligo 或 siRNA 序列中含有 LNA™ 並不會影響到其正常的轉染或運送效率,因此可以使用原本的轉染或運送條件來進行實驗,同時還可藉由引入 LNA™ 於抑制探針序列中來達到提升抑制能力、延長作用時間的效果。例如在 2010 年的 Science 期刊中 Santaris 藥廠則以靜脈注射方式將含有 phosphorothioate 骨架的 LNA/DNA mix oligo 送入黑猩猩體內證實並其具有治療 C 型肝炎病毒感染的效果 (Science. 2010 Jan 8;327(5962):198-201.),顯示 LNA/DNA/LNA gapmer 結構的 antisense oligo 的確具有發展為基因治療藥物的強大潛力。

Exiqon 公司獨家推出「Antisense LNA™ GapmeRs」產品,可針對任何長度大於 80 nucleotides 的目標 RNA 序列進行客製化設計與合成,幫助您輕鬆完成 mRNA 或 lncRNA (long non-coding RNA) 功能分析。設計時採用 Exiqon 專業序列演算軟體,可避免非專一性結合、並確保高抑制效率!彈性多樣化的的規格選擇,滿足從大量篩選 (screening)、細胞實驗 (in vitro)、至動物實驗 (in vivo) 不同實驗等級的需求。請按此瀏覽更多詳細說明,或洽詢伯森業務專員索取進一步產品資訊。

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