MiraCLEAN® Endotoxin Removal Kit
早在 1995 年即有文獻指出 plasmid DNA 的內毒素 (endotoxin) 污染量與轉染 (transfection) 效率降低具有正相關性。針對此類污染問題，伯森推薦採用美國 Mirus Bio 公司所出品的快速內毒素去除劑「MiraCLEAN® Endotoxin Removal Kit」，可簡易有效地將 plasmid DNA 的內毒素污染量降低至 <30 EU/mg，其試劑特性包含：
- 有效去除 plasmid DNA 的內毒素污染量，增加基因轉染效率。
- 經去污處理過的 plasmid DNA 可適用在 in vitro 及 in vivo 基因轉染實驗。
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關於內毒素 (Endotoxin)
內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜所含有的脂多醣體 (lipopolysaccharide, LPS)，在細菌解體死亡 (lysis) 時會被釋放出來，於培養環境中 (in vitro) 會影響細胞外形與正常生理功能，而在動物體內 (in vivo) 則會引起發炎發熱等免疫反應。由於一般採用 plasmid DNA 作為轉染物質的實驗者通常會先利用 E. coli 這類革蘭氏陰性菌株作為宿主大量複製表現 plasmid DNA 後，再將 plasmid DNA 自細菌中萃取出來進行基因轉染實驗，而帶有負電的內毒素通常也會一併連同 plasmid DNA 被萃取下來，造成 DNA 樣本的污染。
作用原理
藉由「兩相微胞系統 (Two-Phase Micellar System)」萃取原理，讓使用者可以透過簡單的操作步驟快速地將 DNA 樣本液中的內毒素與 plasmid DNA 分離。含有粉紅色指示劑的 MiraClean® 試劑內含由非離子界面活性劑所形成的微胞 (micelle)，此微胞可將內毒素包裹在其中。由於在特定溫度下非離子界面活性劑會自動形成高濃度微胞與低濃度微胞兩層不同液相，因此可藉由簡單的升溫與短暫離心動作，以肉眼觀察到【試劑-DNA 混和液】由原來的均勻粉色分成兩層，此時移除掉的內毒素即位於下層粉紅色液相，純化後的 plasmid DNA 則位於上層無色的液相。
產品效能
Fig. 1 | MiraCLEAN® Kit Effectively Removes Endotoxin from Crude Plasmid DNA Preparations. Plasmid DNA was spiked with E. coli endotoxin at 50,000 endotoxin units per mg of DNA (EU/mg). The DNA was treated with the MiraCLEAN® Kit using three rounds of extraction. Endotoxin levels were decreased by over 2,000 fold.
Fig. 2 | Plasmid DNA Exhibits High Transfection Efficiency After Treatment with MiraCLEAN® Kit. COS-7 cells were transfected with 2 µg of plasmid DNA and 2µl of the TransIT®-LT1 Reagent in 6-well plates. Cells were harvested at 24 hours post transfection and assayed for luciferase expression.
訂購資訊
| Product Name | Pack Size | Cat. No. |
|---|---|---|
| MiraCLEAN® Endotoxin Removal Kit | for 10 mg DNA | MR-MIR5910 |
| for 100 mg DNA | MR-MIR5900 |
