更精確靈敏的乳癌研究工具：全均質化的 HER 家族蛋白質定量分析平台

根據世界衛生組織最新統計數據，乳癌已成為全球盛行率最高的癌症，2020 年全球有 230 萬女性被診斷出罹患乳癌，並有 68.5 萬女性因乳癌死去。而在台灣，根據衛生福利部公佈的「109年國人死因統計結果」，癌症（惡性腫瘤）位居國人死因首位，其中女性乳癌高居十大癌症死亡率的第四位，顯示乳癌是女性生命健康的極大威脅，需要更多精確靈敏的研究工具投入，以協助疾病診斷與治療藥物開發。

三陰性乳癌是復發率最高以及五年存活率最低的一種乳癌類型，法國蒙彼利埃癌症研究所 (Institut régional du Cancer de Montpellier, ICM) Evelyne Lopez-Crapez 教授研究團隊企圖找出可以用來評估病人復發風險的生物標記 (biomarker)。他們將目標定睛在經常作為乳癌治療藥物標靶的 HER 蛋白質家族成員「HER1, HER2 與 HER3」，期望透過定量 51 位三陰性乳癌患者石蠟包埋 (FFPE) 組織中的 HER 蛋白質表現量，了解 HER 蛋白作為三陰性乳癌預後指標的可能性。

他們捨棄使用臨床檢驗常用的免疫組織化學染色 (IHC) 方法，改以 Cisbio (part of Revvity) 所開發的 HTRF® 技術建立全均質化的 HER 蛋白質定量平台。與 IHC 相比，所建立的 HTRF® 檢測平台靈敏度提高了 20 倍，並且偵測結果能夠完全量化，避免 IHC 方法仰賴檢測人員主觀判斷的問題，提高檢驗結果的再現性。與市售 ELISA Kit 相比，雖然 HTRF® 的靈敏度較弱（HTRF® 為 0.19-0.6 ng/ml*，ELISA Kit 為 <0.1 ng/ml (*HER1, HER2, HER3 三種蛋白質的偵測靈敏度不同)），然而 HTRF® 卻有更加廣泛的線性偵測範圍（HTRF® 為 250 倍，ELISA Kit 為 <100 倍）以及遠低於 ELISA Kit 的樣本需求量（16 μl vs 100 μl）。

HTRF® 定量平台的偵測原理是以分別標定有供體螢光 “Europium Cryptate” 和受體螢光 “d2” 的兩支單株抗體來專一性辨識目標蛋白。以 HER1 為例，作者直接使用了 Cisbio 試劑套組【Total EGFR cellular kit (#64NG1PEG)】內含的兩支已分別標定好 Eu Cryptate 與 d2 螢光基團的抗體；當樣本中存在有 HER1 蛋白時，透過抗原與抗體間的結合，兩支抗體得以靠近，同時也拉近了供體螢光與受體螢光間的距離。在 337 nm 光源激發下，供體螢光所發出的能量 (620 nm) 將會轉移至鄰近的受體螢光，激發其產生 665 nm 螢光訊號。藉由比對重組蛋白質定量結果所繪製出的標準曲線，以及 SYBR Green 定量 DNA 後推算出的細胞數量，即可換算出每個待測樣本中含有的 HER 蛋白量 (number of receptors per cell)。

IMAGE © Br J Cancer. 2020 Feb;122(3):397-404. Fig. 3b.

將三種 HER 蛋白質的 HTRF® 定量結果與 51 位三陰性乳癌病患資料進行分析比對，發現僅有 HER2 蛋白質表現量與病患的無復發存活率 (relapse-free survival, RFS) 具有統計意義上的相關性，可望成為三陰性乳癌的預後指標，並有待更大規模的實驗驗證其臨床指標意義。值得一提的是，作者認為使用 HTRF® 偵測 FFPE 組織中的蛋白質表現量，不僅具有高再現性與高靈敏度，且操作簡單不需特別訓練即可上手，非常適合作為 IHC 的取代方法應用於臨床組織樣本檢驗。詳細內容可參閱作者發表於《British Journal of Cancer》期刊的研究論文。完整 HTRF® 產品資訊與技術支援，歡迎洽詢 Cisbio 台灣代理 — 伯森生技（👨‍💻線上聯絡伯森業務專員）。

您可透過下方連結瀏覽更多相關資訊：

• 乳癌細胞株之細胞趨化性實驗玻片：μ-Slide Chemotaxis (ibidi)
• Ki67 - 癌症中的診斷和預後價值
• [抗體實戰技巧] Ki67, CD31, NLRP3 實驗成功小撇步
• Abcam 乳癌研究抗體（IHC 實驗適用）