LANCE 與 LANCE Ultra 技術

LANCE 與 LANCE Ultra 技術原理

LANCE 與 LANCE Ultra 皆為時差性螢光共振能量轉移偵測平台 (Time-Resolved Fluoresence Resonance Energy Transfer assay, TR-FRET assay)，其作用原理是藉由時差性螢光分子作為能量捐贈者 (energy donor)，在一定的作用距離下 (約 10 nm) 可將能量轉移至鄰近的螢光分子，而此能量接受者 (energy acceptor) 即會受到激發，產生特定波長的螢光訊號供實驗者偵測。

經典「LANCE」與新一代 「LANCE Ultra」兩種系列產品皆採用 "Eu chelate" 作為能量捐贈者，此螯合物不但可發出強烈且專一的螢光訊號，並且具有時差性螢光 (Time-Resolved Fluorescence, TRF) 特性，其發射光生命週期較長，因此可讓研究者避免接收到由背景光源激發受體螢光分子所產生的螢光訊號，達到降低實驗背景值的效果，是非常適合作為 TR-FRET 分析平台的能量捐贈分子 (donor dye)。

而在能量接受分子 (acceptor dye) 的部分，經典「LANCE」所採用的為 "APC (allophycocyanin)" 螢光分子，此分子經由 Eu chelate 發射光的激發後可發射出 665 nm 的螢光訊號。新一代「LANCE Ultra」則採用 ULight 作為能量接受分子，此分子改善了 APC 分子的數個缺點，包含：

1. APC 螢光分子對光非常敏感，因此在實驗進行或儲存時必須小心加以避光，造成操作上的困擾；而 ULight 螢光分子則不具有此困擾，因此可更加簡便地操作儲存。

2. APC 螢光分子是一個將近 100 kD 的大分子，因此在進行小分子偵測時 (如：peptides、oligonucleotides、cAMP)，為避免造成空間結構上的立體障礙，無法直接將 APC 分子標定於待測物上，而必須間接藉由其他標定分子間的結合作用將 APC 分子標定於待測物上 (如：APC-Streptavidine (APC-SA) 與 Biotinylated-peptide)。ULight 螢光分子雖與 APC 螢光分子具有類似的螢光特性 (激發光與發射光波長相似)，但因為分子量遠小於 APC 分子，因此不但與 APC 分子相同可藉由其他標定分子間的結合作用將 ULight 分子標定於待測物上，亦可將 ULight 分子直接標定於待測物上，實驗平台設計可具有更多彈性。

以上圖為例，分別使用經典「LANCE」與「LANCE Ultra」系列產品設計出三種實驗平台以評估 “Staurosporine” 對 Src tyrosine kinase 的抑制效果。所運用到的實驗材料包含：磷酸化激酶 Src tyrosine kinase、磷酸化反應受質 poly-GT (poly-Glu-Tyr)、磷酸化反應抑制劑 Staurosporine，以及 LANCE/ LANCE Ultra 相關產品等…。結果顯示三種實驗平台皆可得到類似的 Staurosporine IC₅₀ 數值，與文獻紀錄相比其數據相差不到一個 log 值，可信度極高 (實驗結果請見下圖，詳細實驗流程說明請按此下載)。

LANCE 與 LANCE Ultra 產品特點

• 適合 Kinase Assay、Histone Modification Assay、Protein-Protein Interaction Assay、DNA-Protein Interaction Assay、Receptor-Ligand Binding Assay、Biomolecule Detection 等多種應用實驗*。
  
• 全均質化 (homogeneous) 實驗流程，流程簡單且不需分離或洗滌步驟，可快速完成大量樣本的偵測實驗。
  
• 偵測效能穩定，平均 Z’ 標準值大於 0.8，確保實驗數據可信度。
  
• 需搭配 OptiPlate 白色多孔盤使用，可彈性選擇 96-, 384-, 1536-well microplate 進行實驗。
• 需搭配 VICTOR™、EnVison™ 等…TRF 偵測儀使用。

LANCE Toolbox

LANCE Toolbox 系列產品可以讓研究者自由組合出多種偵測平台，以彈性符合多元化的實驗需求。應用實驗包含 Kinase Assay、Histone Modification Assay、Protein-Protein Interaction Assay、DNA-Protein Interaction Assay、Receptor-Ligand Binding Assay、Biomolecule Detection 等…。歡迎洽詢索取詳細技術資料。

訂購資訊 (請點擊下列分類選項，瀏覽詳細訂購資訊)

Eu Donor Dye-labeled Reagents

Product Pack Size Cat. No. LANCE Eu-W1024 Anti-6xHis 10 µg PK-AD0205 50 µg PK-AD0110 1 mg PK-AD0111 LANCE Eu-W1024 Anti-c-Myc 10 µg PK-AD0206 50 µg PK-AD0114 1 mg PK-AD0115 LANCE Eu-W1024 labeled anti-GST antibody 10 µg PK-AD0252 50 µg PK-AD0253 1 mg PK-AD0254 LANCE Eu-W1024 Anti-HA 50 µg PK-AD0084 1 mg PK-AD0085 LANCE Eu-W1024 Anti-Human IgG 10 µg PK-AD0212 50 µg PK-AD0074 1 mg PK-AD0075 LANCE Eu-W1024 Anti-Mouse IgG 50 µg PK-AD0076 1 mg PK-AD0077 LANCE Eu-W1024 Anti-Rabbit IgG 50 µg PK-AD0082 1 mg PK-AD0083 LANCE Eu-W1024 Biotin 10 nmole PK-CR91-100 LANCE Eu-W1024 Protein G 10 µg PK-AD0211 50 µg PK-AD0070 1 mg PK-AD0071 LANCE Eu-W1024 Streptavidin* 10 µg PK-AD0063 50 µg PK-AD0062 1 mg PK-AD0061 LANCE Eu-W8044 Streptavidin* 50 µg PK-AD0060 *For most LANCE applications the W1024 series of Europium chelates can be used. For assays that require a high EDTA concentration, a high temperature or a pH below 7, the W8044 series of Europium chelates is a better choice because of their greater stability.

Eu Labeling Reagents

Product Pack Size Cat. No. LANCE Eu-W1024-ITC Chelate and Eu Standard Isothiocyanate (ITC) activated chelates react primarily with free amine groups, including the N-terminus of a protein or peptide as well as lysine residues on antibodies, proteins, and peptides. 100 µg PK-AD0096 1 mg PK-AD0013 LANCE Eu-W1284-Iodoacetamido Chelate and Eu Standard Iodoacetamide (IA) activated chelates react with free sulfhydryl groups (including cysteines) on peptides and proteins to form a stable, covalent thio-ether bonds. 100 µg PK-AD0107 1 mg PK-AD0014 LANCE Eu-W8044-DTA Chelate and Eu Standard* Diochlorotriazine (DTA) activated chelates react with free amino, sulfhydryl, and hydroxyl groups and are suitable for labeling proteins, peptides, nucleic acids, and small molecules containing these functional groups. 1 mg PK-AD0020 *LANCE Eu-W1024 chelates are preferred in most High Throughput Screening (HTS) applications due to their low fluorescent background and high S:B in TR-FRET assays. For assays that require high concentrations of EDTA or other chelators, a high temperature, or a pH below 7, the Eu-W8044 chelate offers greater stability.

ULight Acceptor Dye-labeled Reagents

Product Pack Size Cat. No. LANCE Ultra ULight-anti-6xHis 1 nmole PK-TRF0105-D 10 nmole PK-TRF0105-M 100 nmole PK-TRF0105-R LANCE Ultra ULight-anti-GST 1 nmole PK-TRF0104-D 10 nmole PK-TRF0104-M 100 nmole PK-TRF0104-R LANCE Ultra ULight-Protein A 1 nmole PK-TRF0103-D 10 nmole PK-TRF0103-M LANCE Ultra ULight-Streptavidin 1 nmole PK-TRF0102-D 10 nmole PK-TRF0102-M 100 nmole PK-TRF0102-R

APC Acceptor Dye-labeled Reagents

Product Pack Size Cat. No. SureLight Allophycocyanin-anti-6His antibody 1 mg PK-AD0059H SureLight Allophycocyanin-anti-c-myc antibody 1 mg PK-AD0059C SureLight Allophycocyanin-anti-GST antibody 1 mg PK-AD0059G SureLight Allophycocyanin-anti-FLAG antibody 1 mg PK-AD0059F SureLight Allophycocyanin-anti-Mouse IgG 1 mg PK-AD0059M SureLight Allophycocyanin-anti-Rabbit IgG 1 mg PK-AD0059R SureLight Allophycocyanin-Streptavidin 1 mg PK-CR130-100 50 mg PK-CR130-150 SureLight Allophycocyanin-WGA (Wheat Germ Agglutinin) 1 mg PK-AD0059W

Other LANCE & LANCE Ultra Products

Product Pack Size Cat. No. LANCE Detection Buffer, 10X 250 ml PK-CR97-100 Stabilizer, 7.5% (DTPA-purified BSA) 50 ml PK-CR84-100