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[PerkinElmer Cisbio 新品發佈] 新冠病毒中和抗體體外篩選試劑盒

[PerkinElmer Cisbio 新品發佈]
新冠病毒中和抗體體外篩選試劑盒

冠狀病毒在電子顯微鏡下以“皇冠”狀外觀而得名,其冠狀外觀源自於病毒外套膜表面突出的棒狀醣蛋白,該表面醣蛋白被命名為棘蛋白 (Spike protein),以下簡稱 S 蛋白。S 蛋白在病毒表面以三聚體型式組成,能與宿主細胞表面受體 (Receptor) 結合。當病毒與宿主細胞結合後,即可藉由病毒外套膜與宿主細胞的細胞膜融合,使病毒 RNA 得以進入細胞中進行複製擴增、並組合形成新的病毒顆粒,最終以外胞吐 (Exocytosis) 的方式離開細胞,引發疾病 [1]。

The structure of a coronavirus particle with the different viral proteins indicated

The structure of a coronavirus particle with the different viral proteins indicated. The S protein is the major target for vaccine development. The spike structure shown is based on the trimeric SARS-CoV-1 spike (PDB: 5XL3). One trimer is shown in dark blue, and the receptor binding domain, a main target of neutralizing antibodies, is highlighted in purple. The other two trimers are shown in light blue. IMAGE © Immunity. 2020 Apr 14;52(4):583-589, Figure 1 [1].

引起本次疫情的 SARS-CoV-2 病毒(新冠病毒)和之前已知的高致病性冠狀病毒「SARS-CoV-1」和「MERS-CoV」同屬於乙型冠狀病毒屬 (Betacoronavirus)。 SARS-CoV-2SARS-CoV-1 表面的 S 蛋白,都是透過與人體細胞表面的「ACE2 受體」結合後進入細胞,進行病毒複製 [1, 2]。根據美國國家衛生研究院 (NIH) 與德州大學奧斯汀分校於今年三月合作發表的《Science》期刊論文“Cryo-EM structure of the 2019-nCoV spike in the prefusion conformation”,透過使用冷凍電子顯微技術觀測新冠病毒 S 蛋白三聚體結構 (解析度為 3.5Å),發現新冠病毒 S 蛋白與 ACE2 受體的結合能力是 SARS-CoV-1 病毒的 10~20 倍!新冠病毒與 ACE2 受體間的高度親和力,或能解釋為何新冠病毒能夠輕易地於人與人之間傳播 [2]。

目前針對新冠肺炎病毒,科研人員採用了多種方法來製定預防和治療措施,包括不活化疫苗 (Inactivated vaccine)、減毒疫苗 (Live attenuated vaccine)、RNA 疫苗、病毒載體疫苗、單克隆中和抗體、融合抑製劑等,其中大多數都是針對 S 蛋白設計的 [1]。

全新 SARS-CoV-2 中和抗體體外篩選試劑盒

PerkinElmer Cisbio 公司運用 HTRF® 技術全新開發了 3 種針對 S 蛋白與 ACE2 結合的中和抗體體外篩選試劑盒。此系列產品具有 Cisbio 產品一貫的優越品質,透過簡易便利的操作流程以及高效穩定的偵測效率,協助科研人員加速藥物與疫苗研發效率。

Cisbio New Kits for high-throughput screening of neutralization antibodies and other blocking agents for SARS-CoV-2
Product Pack Size Cat. No.
ACE2/SPIKE(WT) Binding Assay Kit 500 tests
10000 tests
63ADK000CB23PEG
63ADK000CB23PEH
ACE2/SPIKE(V367F) Binding Assay Kit* 500 tests
10000 tests
63ADK000CB24PEG
63ADK000CB24PEH
ACE2/SPIKE(N354D, D364Y) Binding Assay Kit* 500 tests
10000 tests
63ADK000CB25PEG
63ADK000CB25PEH

※ 帶有 V367FN354D/D364Y 序列突變的 S 蛋白,相較於野生型 S 蛋白,對 ACE2 受體具有更高的親和力,此特性有可能促使病毒變得更加具有傳染力 [3]。

檢測原理

當抗體或化合物阻斷 S 蛋白和 ACE2 結合時,HTRF 訊號即會下降,藉由 IC₅₀ 數值即可判斷抗體或藥物的抑制效果。

Principle of SARS-CoV-2 Spike/ACE2 Binding Assay

操作步驟

Protocol of SARS-CoV-2 Spike/ACE2 Binding Assay

部分數據展示

使用同一個非選擇性中和抗體「Anti-2019-nCoV S1 mAb」,檢測其分別對 (A) WT 野生型 S 蛋白、(B) V367F 單突變 S 蛋白、(C) N354D/D364Y 雙突變 S 蛋白與 ACE2 結合的抑制效果。

Data of SARS-CoV-2 Spike/ACE2 Binding Assay

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References

  1. SARS-CoV-2 Vaccines: Status Report. Immunity. 2020 Apr 14;52(4):583-589. PMID: 32259480
  2. Cryo-EM structure of the 2019-nCoV spike in the prefusion conformation. Science. 2020 Mar 13;367(6483):1260-1263. PMID: 32075877
  3. Emergence of RBD mutations in circulating SARS-CoV-2 strains enhancing the structural stability and human ACE2 receptor affinity of the spike protein. bioRxiv. 2020. DOI: 10.1101/2020.03.15.991844
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